ISSN 2224-5308 Серия биологическая и медицинская. № 6. 2016 N E W S
OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE REPUBLIC OF KAZAKHSTAN SERIES OF BIOLOGICAL AND MEDICAL
ISSN 2224-5308
Volume 6, Number 318 (2016), 179 – 184
A. M. Esimova, Sh. B. Tasybaeva, Z. K. Narymbaeva, D. E. Kudasova, M. D. Tulegen M. Auezov SKSU, Shymkent, Kazakhstan.
E-mail: [email protected]
EFFICIENCY OF SOUTH KAZAKHSTAN GEOTHERMAL WATER
Питательные вещества поступают в клетку из внешней среды, при голодании дрожжи используют свои резервные вещества: гликоген, трегалозу, липиды, азотистые соединения.
При выращивании дрожжей на спиртовых заводах в аэробных условиях основное количество необ- ходимого им фосфора (до 80–90%) усваивается главным образом в начальный период брожения. Поэтому в молодых, размножающихся клетках его примерно в 2 раза больше, чем в старых непочкующихся.
Ключевые слова: геотермальные воды, микроорганизмы, биологические активные вещества, Saccaro- myces cerevisial, микробиологический процесс.
Введение. Современному обществу трудно представить свое существование без широкого использования продуктов, полученных с помощью микроорганизмов. Промышленное производ- ство продуктов микробного синтеза представляет собой единую биотехнологическую систему, которая складывается из последовательных стадий и операций, количество и особенности которых зависят от вида производимой продукции. При этом важным фактором создания эффективной биотехнологической системы является подбор питательной среды, обеспечивающей потребности культуры микроорганизмов в химических компонентах, необходимых для оптимального биосинтеза целевого продукта [1].
Основной проблемой процесса производства этанола, в том числе из мелассы является высо- кая себестоимость за счет минеральных материалов, композиционных биологических стимуля- торов и различных ферментных препаратов. Новая технология биосинтеза этанола является перс- пективной за счет использования в микробиологических процессах возобновляемых природных ресурсов – подземных вод. Установлено, что геотермальная вода в составе питательной среды является новым источником минерального и органического питания дрожжевых организмов [2-4].
Геотермальные воды подземных вод южного региона являются новыми нетрадиционными возобновляемыми природными источниками для использования не только в традиционных целях (лечебные препараты, подогрев парников и т.д.), но и для применения в микробиологических процессах, например, для приготовления питательных сред, так как в составе подземных вод содержатся минеральные и органические источники питания и БАВ [5].
Методы исследования. Исследованиями было установлено, что геотермальная вода, богатая минеральными и органическими соединениями, в составе питательной среды весьма благоприятна для роста и развития дрожжей вида Saccharomyces cerevisiae, способствует увеличению выхода биомассы, усилению активности ферментов, синтезу белка, резервных углеводов и других важных компонентов клетки. Наличие в геотермальной воде вышеуказанных веществ, необходимых для жизнедеятельности организмов, создает весьма благоприятные условия в среде культивирования для получения биомассы [6].
Для сбраживания сахаров, содержащихся в сусле в спиртовом производстве, применяют дрожжи вида Saccharomuses cerevisial.
На спиртовых заводах, перерабатывающих мелассу, применяют дрожжи, которые сбраживают сахарозу, глюкозу, фруктозу и частично раффинозу (расы Я, В, Ял, гибриды, Г-67, Г-105, Г-112).
В производственных средах присутствуют одновременно молодые, зрелые, почкующиеся, старые и отмершие клетки, из них наибольшей бродильной активностью обладают зрелые клетки.
Для питания дрожжей необходимо N2О6, азотистые вещества, минеральные соединения, в частности, фосфор.
Для нормального роста жизнедеятельности дрожжи нуждаются в витаминах и стимуляторах роста.
Важное значение для развития дрожжевых клеток имеет содержание питательной среде азота.
Дрожжевые клетки способны синтезировать все аминокислоты из неорганических азотистых соединений. Однако дрожжи могут использовать в качестве источника углерода лишь органи- ческие соединения, при чем они не могут синтезировать аминокислоты не- посредственно из са- хара, а только из промежуточных продуктов распада гексоз, которые образуются при дыхании и брожении. Дрожжи вида Saccaromyces cerevisial, применяемые на спиртовых заводах, усваивают две формы азота: аммиачный и азоторганических веществ.
Питательные вещества поступают в клетку из внешней среды, при голодании дрожжи исполь- зуют свои резервные вещества: гликоген, трегалозу, липиды, азотистые соединения [7-10].
ISSN 2224-5308 Серия биологическая и медицинская. № 6. 2016 В состав углеродного питания дрожжей входят следующие содержащие углерод органические соединения: глюкоза, монноза, галактоза, фруктоза. Пентозы спиртовые дрожжи не усваивают.
В отсутствии гексоз источниками углерода могут быть глицерин, маннит, этиловый и другие спирты.
Дрожжи способны синтезировать все аминокислоты, входящие в состав их белков, непосред- ственно из неорганических азотистых соединений [11].
При выращивании дрожжей на спиртовых заводах в аэробных условиях основное количество необходимого им фосфора (до 80–90%) усваивается главным образом в начальный период бро- жения. Поэтому в молодых, размножающихся клетках его примерно в 2 раза больше, чем в старых непочкующихся.
Мелассное сусле бедно фосфором, поэтому для нормального развития дрожжей добавляется ортофосфорная кислота.
Способ сбраживания мелассного сусла при производстве спирта [12] предусматривает добавление в мелассу вспомогательных материалов, разбавление водой и брожение ее в непре- рывном потоке при последовательном сведении двух рас дрожжей, первая из которых спиртовая, отличающийся тем, что с целью повышения выхода спирта и ускачения процесса в качестве вто- рой расы дрожжей используют пивные дрожжи, которые вводят в сусло после сбраживания мелассы спиртовыми дрожжами до содержания сахаров 20–30 г/л, в процесс сбраживания среды 0,060–0,065 ч - 1.
Способ производства спирта из мелассы [13, 14], предусматривает приготовление из сахаро- содержащего сырья сусла, подкисление его и обогащение питательными веществами, введение кислотного реагента, дрожжегенерирование и сбраживание сусла и перегонку бражки, отличаю- щихся тем, что с целью повышения выхода спирта в качестве кислотного реагента используют кислотный экстракт – отход процесса денуклеинщеции дрожжей в количестве 5–10% к объему мелассного сусла.
Поэтому целью данной работы являлось исследование влияния БАВ геотермальной воды на состав питательной среды на основе мелассы для культивирования спиртовых дрожжей и выход этилового спирта. После тщательного анализа имеющихся в области источников использовали геотермальные воды источника «Амангельды» Отрарского района Южно-Казахстанской области.
Критериями для отбора природной геотермальной воды служили отсутствие радиоактивности, свинца, ртути, лития и алюминия, а также степень минерализации и органолептические свойства.
Вода источника «Амангельди» является сульфатно-хлоридно-гидрокарбонатной натриевой и имеет следующий состав (г/л): аммоний – 0,0013; натрий – 1,62; калий – 0,0098; магний – 0,91;
кальций – 0,012; железо – 0,001; марганец – 0,00004; фтор – 0,0015; хлор – 0,75; бром – 0,91; йод – 0,0009; сульфаты – 0,70; гидрокорбанаты – 1,12; борная кислота – 0,021, кремниевая кислота – 0,05. Вода содержит также органические компоненты, в том числе (мг/л): битум – 1,5 и гумусовые вещества – 9,2. По органолептическим показателям вода представляет собой бесцветную жид- кость, без запаха, с привкусом мела. Углекислота в свободной форме присутствует в количестве 158,3 мг/л, сероводород не обнаружен.
Объектом исследования служили также дрожжи S.cerevisiae АН-30 из коллекции микро- организмов лаборатории биотехнологии ЮКГУ им. М. Ауезова (Шымкент).
Результаты исследования. Для культивирования дрожжей использовали мелассные пита- тельные среды с геотермальной водой и без нее. Процесс сбраживания осуществляли глубинным методом в периодическом режиме с циклом 48 ч в анаэробных условиях на лабораторной уста- новке при температуре 25±2 С. К мелассе добавляли разбавленную геотермальную воду с минера- лизацией 4,2–4,5 г/л с определенным качественным и количественным составом. Содержание углеводов составило около 19,0 г/100 см3. Стерильную питательную среду разливали по 1,10 л в сосуды вместимостью 2,5 л, затем засевали вегетативной культурой дрожжей S.cerevisiae АН -30 в количестве 100 мл из дрожжевой суспензии последней стадии адаптации на мелассной среде с геотермальной водой. Процесс сбраживания на традиционной мелассной питательной среде осуществляли также, но с содержанием гидроортофосфата аммония 1,2 г/л, сернокислого аммония 4,0 г/л. Вегетативная культура из дрожжевой суспензии последней стадии адаптации на мелассной питательной среде содержала 55,9 млн/мл клеток. По окончании эксперимента дрожжи отделяли
от культуральной жидкости центрифугированием на лабораторной стационарной центрифуге. На всех этапах исследований осуществляли контроль за технологическими свойствами сбражи- ваемого субстрата и морфологией дрожжевых клеток [15-17].
Накопление популяции дрожжей с интенсификацией углеводного обмена наблюдали на всех этапах процесса на питательной среде с использованием геотермальной воды (рисунок).
Динамика образования биомассы дрожжей S.cerevisae АН -30 при культивировании на традиционной питательной среде (1) и среде с геотермальной водой (2)
Исследование морфологических свойств дрожжевой культуры на стадии получения инокулята показали, что после 48 часовой ферментации в 1 мл опытной дрожжевой суспензии содержалось 120 млн/мл клеток, имеющих округлую (80%) и овальную (20%) форму с размерами от 4х6 до 6х8 µкм;
мертвых клеток – 0,02%; почкующихся – 18%. При этом в контрольной суспензии было 61,1 млн/мл клеток в основном округлой (90%) и овально – округлой формы (10%); мертвых клеток – 0,04%;
почкующихся – 15,6 %. Повышенная скорость метаболических процессов в клетках на среде с геотермальной водой приводит к тому, что фазы роста дрожжей S.cerevisae АН-30 протекают с опережением относительно контроля [18-20].
Наличие в геотермальной воде таких важных биологически активных веществ, необходимых для жизнедеятельности живых организмов, как К, Na, Mg, Ca, Fe, Mn, борная, кремниевая кисло- ты, органические вещества, являющиеся стимуляторами физиолого-биохимических процессов и активаторами мембранных перестроек в живой клетке, создает благоприятные условия для интенсификации спиртового брожения с образованием более высокого содержания этилового спирта. Различный биосинтез побочных продуктов в разных питательных средах может являться результатом регуляторных функций клетки. На мелассной питательной среде геотермальной воды, несмотря на повышенный выход спирта, синтезируется почти вдвое меньше примесных соеди- нений в основном за счет снижения образования высших спиртов и альдегидов по сравнению с контрольным вариантом. Высшие спирты представлены в исследуемых образцах следующими компонентами: пропанол-1, пропанол-2, бутанол-1, бутанол-2, изобутанол, изоамилол, гексанол, которые сами по себе, и тем более присутствуя вместе, отрицательно влияют на конечный продукт.
Таким образом, использование геотермальной воды как биологически активного стимулятора в составе питательной среды позволяет не только интенсифицировать процесс брожения, но и улучшить качество целевого продукта.
Выводы. Установлено также, что чем больше размер клеток, тем интенсивнее осуществляется синтез этанола. Выявлена возможность изменения регуляции метаболизма дрожжей. Установлена интенсификация биосинтеза этанола в сбраживаемой среде (на 28%) и снижение нежелательных примесных соединений (на 43%). Обнаружена большая степень чистоты сброженного продукта – сырья для производства высококачественного спирта – ректификата.
0 20 40 60 80 100 120 140
1 2 3 4 5
млн/мл
Сутки
1 2 1
2
1 2
1 2
1 2
ISSN 2224-5308 Серия биологическая и медицинская. № 6. 2016 ЛИТЕРАТУРА
[1] Кунце В. Технология солода и пива / В. Кунце, Г. Мит. – СПб.: Изд-во Профессия, 2003. – 912 с.
[2] Абрамов Ш.А., Халилова Э.А., Магадаева С.О. Новое в биотехнологии синтез этанола в сбраживаемой среде //
Хранение и переработка сельхозсырья. – 2006. – № 12. – С. 51-54.
[3] Абрамов Ш.А., Халилова Э.А. Геотермальные воды в биотехнологическом процессе получения хлебопекарных дрожжей // Вестник ДНЦ РАН. – 2002. – № 13. – С. 46-53.
[4] Абрамов Ш.А. Новые технологии пищевых продуктов на основе использования геотермальных вод юга России // Юг России: экология, развитие. – 2008. – № 2. – С. 6-10.
[5] Котенко С.Ц. Влияние условий спиртового брожения на содержание витаминов в дрожжах S. cerevisiae //
Хранение и переработка сельхозсырья. – 2008. – № 7. – С. 54-57.
[6] Абрамов Ш.А., Котенко С.Ц., Эфендиева Д.А., Халилова Э.А., Исламмагомедова Э.А., Даунова С.М. Новая питательная среда для выращивания дрожжей // Прикл. биохимия и микробиология. – 1995. – Т. 31, № 2. – С. 232-233.
[7] Абрамов Ш.А., Котенко С.Ц., Рамазанов А.Ш., Исламова Ф.И. Содержание витаминов в дрожжах рода Sac- charomyces в зависимости от состава питательной среды // Прикл. биохимия и микробиология. – 2003. – Т. 39, № 4. – С. 438-440.
[8] Волкова Л.Д., Егоров Н.С., Яровенко В.Л. Влияние источника азотистого питания на рост дрожжей Endo- mycopsis Fibuligera штамма 21 и синтез ими глюкоамилазы // Прикл. биохимия и микробиология. – 1998. – Т. 14, № 2. – С. 200.
[9] Патент № 1693053 Россия. Способ производства спирта из мелассы.
[10] Халилова Э.А., Абрамов Ш.А. Свободные аминокислоты в биомассе и сушеных дрожжах Saccharomyсes
cerevisiae в зависимости от состава питательной среды // Прикл. биохимия и микробиология. – 2001. – Т. 37, № 5.–
С. 578-581.
[11] Зиновьева М. Е., Гамаюрова В. С. Влияние источника углерода и индукторов на рост и липолитическую ак- тивность дрожжей // Вестник Казанского технологического университета. – 2013. – № 7. – Т. 16.
[12] Патент № 998503 Россия. Способ непрерывного сбраживания мелассного сусла при производстве спирта / Сотников В.А., Курамшин Р.А., Климчак Е.Б., Гамаюрова В.С., Дьяконский П.И., 1998.
[13] Патент РФ № 1693053 Способ сбраживания мелассного сусла / В. В. Рудая, В, К. Янчевский, В. Н. Головченко, Л. В. Малыш и Е. К. Вовнянко, 1982.
[14] Патент РФ № 2329302. Способ сбраживания мелассного сусла // Ш.А. Абрамов,Э.А., Халилова Б.И. // 2008. –
№ 20. – С. 167.
[15] Яровенко В.А., Марченко В.А., Смирнов В.А. Технология спирта. – М.: Колос, 1990. – 464 с.
[16] Мальченко А.А., Кришетул Ф.Б., Комплексная переработка мелассы на спирт и другие продукты. – Киев:
Химия, 1993. – 220 с.
[17] Яковлев В.И. Технология микробиологического синтеза. – Л.: Химия, 1987. – 272 с.
[18] Графкина М.В., Михайлов В.Л., Иванов К.С. Экология и экологическая безопасность автомобиля: Учебник / М.В.Графкина, В.А. Михайлов, К.С.Иванов. – М.: ФОРУМ, 2009. – 320 с.
[19] Тихомиров В.Г. Технология и организация пивоваренного и безалкогольного производств / В. Г. Тихомиров. – М.: Колос, 2007. – 461 с.
[20] Меледина Т.В. Технологический подход к регулированию сенсорного профиля пива: в 2 ч / Т. В. Меледина, Е. Л. Лебедева // Индустрия напитков. – 2004. – Ч. 1. Высшие спирты. – № 4. – С. 10-14.
REFERENCES
[1] Kunce V. Tehnologija soloda i piva / V. Kunce, G. Mit. SPb.: Izd-vo Professija, 2003. – 912 p.
[2] Abramov Sh.A., Halilova Je.A., Magadaeva S.O. Novye v biotehnologii sintez jetanola vybrazhivaemoj srede //
Hranenie i pererabotka sel'hozsyr'ja. 2006. N 12. P. 51-54.
[3] Abramov Sh.A., Halilova Je.A. Geotermal'nye vody v biotehnologicheskom processe poluchenija hlebopekarnyh drozhzhej // Vestnik DNC RAN. 2002. № 13. P. 46-53.
[4] Abramov Sh.A. Novye tehnologii pishhevyh produktov na osnove ispol'zovanija geotermal'nyh vod juga Rossii // Jug Rossii: jekologija, razvitie. 2008. N 2. P. 6-10.
[5] Kotenko S.C. Vlijanie uslovij spirtovogo brozhenija na soderzhanie vitaminov v drozhzhah S. cerevisiae // Hranenie i pererabotka sel'hozsyr'ja. 2008. N 7. P. 54-57.
[6] Abramov Sh.A., Kotenko S.C., Jefendieva D.A., Halilova Je.A., Islammagomedova Je.A., Daunova S.M. Novaja pitatel'naja sreda dlja vyrashhivanija drozhzhej // Prikl. biohimija i mikrobiologija. 1995. Vol. 31, N 2. P. 232-233.
[7] Abramov Sh.A., Kotenko S.C., Ramazanov A.Sh., Islamova F.I. Soderzhanie vitaminov v drozhzhah roda Saccha- romyces v zavisimosti ot sostava pitatel'noj sredy // Prikl. biohimija i mikrobiologija. 2003. Vol. 39, N 4. P. 438-440.
[8] Volkova L.D., Egorov N.S., Jarovenko V.L. Vlijanie istochnika azotistogo pitanija na rost drozhzhej Endomycopsis Fibuligera shtamma 21 i sintez imi gljukoamilazy // Prikl. biohimija i mikrobiologija. 1998. Vol. 14, N 2. P. 200.
[9] Patent № 1693053 Rossija. Sposob proizvodstva spirta iz melassy
[10] Halilova Je.A., Abramov Sh.A. Svobodnye aminokisloty v biomasse i sushenyh drozhzhah Saccharomyses cerevisiae v zavisimosti ot sostava pitatel'noj sredy // Prikl. biohimija i mikrobiologija. 2001. Vol. 37, N 5. P. 578-581.
[11] Zinov'eva M. E., Gamajurova V. S. Vlijanie istochnika ugleroda i induktorov na rost i lipoliticheskuju aktivnost' drozh- zhej // Vestnik Kazanskogo tehnologicheskogo universiteta. 2013. Vol. 16, N 7.
[12] Patent № 998503 Rossija. Sposob nepreryvnogo sbrazhivanija melassnogo susla pri proizvodstve spirta / Sotni- kov V.A., Kuramshin R.A., Klimchak E.B., Gamajurova V.S., D'jakonskij P.I., 1998.
[13] Patent RF № 1693053 Sposob sbrazhivanija melassnogo susla / V. V. Rudaja, V, K. Janchevskij, V. N. Golovchenko, L. V. Malysh i E. K. Vovnjanko, 1982.
[14] Patent RF № 2329302. Sposob sbrazhivanija melassnogo susla // Sh.A. Abramov,Je.A., Halilova B.I. // 2008. N 20.
P. 167.
[15] Jarovenko V.A., Marchenko V.A., Smirnov V.A. Tehnologija spirta. M.: Kolos, 1990. 464 p.
[16] Mal'chenko A.A., Krishetul F.B., Kompleksnaja pererabotka melassy na spirt i drugie produkty. Kiev: Himija, 1993.
220 p.
[17] Jakovlev V.I. Tehnologija mikrobiologicheskogo sinteza. L.: Himija, 1987. 272 p.
[18] Grafkina M.V., Mihajlov V.L., Ivanov K.S. Jekologija i jekologicheskaja bezopasnost' avtomobilja:uchebnik / M. V. Grafkina, V. A. Mihajlov, K. S. Ivanov. M.: FORUM, 2009. 320 p.
[19] Tihomirov V.G. Tehnologija i organizacija pivovarennogo i bezalkogol'nogo proizvodstv. M.: Kolos, 2007. 461 p.
[20] Meledina T.V. Tehnologicheskij podhod k regulirovaniju sensornogo profilja piva: v 2 ch. / T. V. Meledina, E. L. Le- bedeva // Industrija napitkov. 2004. Ch. 1. Vysshie spirty. N 4. P. 10-14.
А. М. Есимова, Ш. Б. Тасыбаева, З. К. Нарымбаева, Д. Е. Кудасова, М. Д. Тулеген М. Əуезов атындағы ОҚМУ, Шымкент, Қазақстан
АШЫТҚЫЛАРДЫ КУЛЬТИВИРЛЕУ КЕЗІНДЕ ҚОРЕКТІК ОРТАЛАРДЫ ДАЙЫНДАУ ҮШІН ОҢТҮСТІК ҚАЗАҚСТАННЫҢ ГЕОТЕРМАЛЬДЫ СУЛАРЫН ПАЙДАЛАНУ ТИІМДІЛІГІ Аннотация. Геотермальды су ашытқы организмінің минералдық жəне органикалық қорегі дəстүрлі емес жаңарған жаңа табиғи көзі болып табылады. Жерасты судың құрамында биологиялық активті зат- тардың болуы жəне оны қолданудың қолжетімді болуы, микробиологиялық процесс үшін геотермальды суды қолдану тиімділігін арттырады.
Ашытқы жасушалардың дамуы үшін қоректік ортада азоттың болуы маңызды болып келеді. Ашытқы жасушалары бейорганикалық азотты қосылыстардан барлық аминқышқылдарды синтездеуге қабілетті болады. Бірақ, ашытқылар көміртегі көзі ретінде органикалық қосылыстарды ғана қолданады, олар амин- қышқылдарды қанттан тікелей синтездей алмайды, олар тек ғана гексоза ыдырауынан аралық өнімдерден синтезделеді, бұл заттар тыныс алу жəне ашыту кезінде түзіледі. Saccaromyces cerevisial түріндегі ашытқы- лар спирт зауыттарында қолданылады жəне азоттың екі түрін сіңіреді: аммиакты жəне азот органикалық заттар.
Қоректік заттар сыртқы ортадан жасушаға түседі, ашытқылар ашыққан кезде өздерінің қордағы зат- тарын қолданады: трегалоза, липидтер, азотты қосылыстар.
Спирт зауыттарында ашытқыларды өсіру кезінде аэробты жағдайларда оларға қажетті фосфордың негізгі мөлшері (80–90% дейін) ашытудың бастапқы кезеңінде сіңіріледі. Сондықтан, бөлінбейтін ескі жасу- шаларға қарағанда, жас көбейетін жасушаларда оның мөлшері шамамен 2 есе көп.
Түйін сөздер: геотермальды сулар, микроағзалар, биологиялық белсенді заттар, Saccaromyces cerevi- sial, микробиологиялық процесс.
Сведения об авторах:
Есимова Анар Маденовна – кандидат химических наук, доцент, Южно-Казахстанский государственный университет им. М. Ауэзова, Высшая школа «Химическая инженерия и Биотехнология», кафедра «Биотех- нология».
Тасыбаева Шолпан Бакибулдаевна – кандидат химических наук, доцент, Южно-Казахстанский государ- ственный университет им. М. Ауэзова, Высшая школа «Химическая инженерия и Биотехнология», кафедра
«Биотехнология».
Нарымбаева Зауре Каркыновна – кандидат химических наук, доцент, Южно-Казахстанский госу- дарственный университет им. М. Ауэзова, Высшая школа «Химическая инженерия и Биотехнология», ка- федра «Биотехнология».
Кудасова Дариха Ерадиловна – магистр, преподаватель, Южно-Казахстанский государственный уни- верситет им. М. Ауэзова, Высшая школа «Химическая инженерия и Биотехнология», кафедра «Биотехно- логия».
Тулеген Молдир Джайыкбаевна – студент группы ХТ-13-5к4, Южно-Казахстанский государственный университет им. М. Ауэзова, Высшая школа «Химическая инженерия и Биотехнология», кафедра «Биотех- нология».
ISSN 2224-5308 Серия биологическая и медицинская. № 6. 2016 N E W S
OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE REPUBLIC OF KAZAKHSTAN SERIES OF BIOLOGICAL AND MEDICAL
ISSN 2224-5308
Volume 6, Number 318 (2016), 185 – 192
B. Sh. Kedelbaev, E. K. Esimov, A. M. Esimova, D. E. Kudasova, A. K. Kuderhan M. Auezov SKSU, Shymkent, Kazakhstan.
E-mail: [email protected]