• Ешқандай Нәтиже Табылған Жоқ

© 2021 Al-Farabi Kazakh National University ISSN 1563-0218; eISSN 2617-7498 Experimental Biology. №2 (87). 2021 https://bb.kaznu.kz

124

МРНТИ 34.43.41 https://doi.org/10.26577/eb.2021.v87.i2.12

Г.Д. Даулет1* , Л.К. Бактыбаева1 , А.С. Соколенко1 , В.К. Ю2,3 , А.Б. Малмакова2,3 , А.Г. Зазыбин3,4 , Н.Н. Беляев5

1 Казахский национальный университет имени аль-Фараби, Казахстан, г. Алматы

2 Институт химических наук имени А.Б. Бектурова, Казахстан, г. Алматы

3 Казахстанско-Британский университет, Казахстан, г. Алматы

4Токийский университет, Япония, Чиба, Кашива, Кашиваноха, 5-1-5, 277-8561

5Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Россия, г. Санкт-Петербург

*e-mail: daulet.guldana@mail.ru

БИОЛОГИЧЕСКИЙ СПЕКТР АКТИВНОСТИ АЗАГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ

Потребность в иммуностимуляторах и иммуномодуляторах на фармацевтическом рынке широкая. Они применяются при лечении врожденных, приобретенных иммунодефицитных состояниях, в лечении онкологических больных, в лечении больных, проживающих в экологически неблагополучных регионах стран и т.д. И перед современной иммунофармакологией стоит глобальная задача в разработке иммуностимуляторов направленного действия. Таким образом, представленный спектр иммуностимулирующих препаратов показывает, что каждая группа иммуностимуляторов обладает определенным спектром побочных эффектов и более перспективной группой являются препараты синтетики. Поэтому, скрининг новых перспективных иммуностимуляторов синтетиков направленного действия обоснован. Для исследования гемограммы периферической крови использовали 48 взрослых лабораторных крыс-альбиносов женского пола, а также фенотипирование лимфоцитов проводили общепринятым методом непрямой флуоресценции с применением моноклональных антител. В результате лейкограмма крови изменилась в сторону развития лейкопенических процессов. В ряду исследованных соединений сравнительно низкую лимфопоэзстимулирующую активность показало соединение 2. Сравнительно высокую лимфопоэзстимулирующую активность в ряду соединений 1, 2 и 3 проявило соединение 3. Эритропоэзстимулирующая и тромбоцитопоэзстимулирующая активность у соединений 1 и 3 была на уровне препарата сравнения метилурацила.

Ключевые слова: иммуностимулятор, иммуномодулятор, эритропоэз, лимфоцитопения, гранулоцитопения.

G.D. Daulet1 *, L.K. Baktybaeva1 , A.S. Sokolenko1, V.К.Yu2,3, A.B. Malmakova2,3, A.G. Zazybin3,4, N.N. Belyaev5

1Аl-Farabi Kazakh National University, Kazakhstan, Almaty

2Institute of Chemical Sciences named after A.B. Bekturov, Kazakhstan, Almaty

3Kazakh-British Technical University, School of Chemical Engineering, Kazakhstan, Almaty

4University of Tokyo Department of Advanced Sciences and Engineering, Japan, Chiba, Kashiwa, Kashivanoha, 5-1-5, 277-8561

5Saint-Petersburg Pasteur Institute, Russia, St. Petersburg

*e-mail: daulet.guldana@mail.ru

Biological spectrum of the activity of azheterocyclic compounds

The demand for immunostimulants and immunomodulators in the pharmaceutical market is wide.

They are used in the treatment of congenital, acquired immunodeficiency states, in the treatment of cancer patients, in the treatment of patients living in ecologically unfavorable regions of countries, etc.

And modern immunopharmacology faces a global challenge in the development of targeted immuno- stimulants. Thus, the presented spectrum of immunostimulating drugs shows that each group of im- munostimulants has a certain spectrum of side effects and synthetic drugs are a more promising group.

Therefore, the screening of new promising immunostimulants of targeted synthetics is justified. To study the hemogram of peripheral blood, we used 48 adult female albino laboratory rats, and phenotyping of lymphocytes was carried out by the conventional method of indirect fluorescence using monoclonal antibodies. As a result, the blood leukogram changed towards the development of leukopenic processes.

Compound 2 exhibited comparatively low lymphopoiesis-stimulating activity among the compounds

125 Г.Д. Даулет и др.

studied. Compound 3 showed comparatively high lymphopoiesis-stimulating activity in the series of compounds 1, 2, and 3. The erythropoiesis-stimulating and thrombocytopoiesis-stimulating activity of compounds 1 and 3 was at the level of the reference drug methyluracil.

Key words: immunostimulant, immunomodulator, erythropoiesis, lymphocytopenia, granulocyto- penia.

Г.Д. Дәулет1*, Л.К.Бактыбаева1, А.С. Соколенко1, В.К. Ю2,3, А.Б. Малмакова2,3, А.Г. Зазыбин3,4, Н.Н. Беляев5

1Әл-Фараби атындағы Қазақ ұлттық университеті, Қазақстан, Алматы қ.

2А.Б. Бектұров атындағы химия ғылымдарының институты, Қазақстан, Алматы қ.

3Қазақ-Британ техникалық университеті, Қазақстан, Алматы қ.

4Токиялық университет, Жапония, Чиба, Кашива, Кашиваноха, 5-1-5, 277-8561

5Пастер атындағы Санкт-Петербургтік эпидемиология және микробиология ҒЗИ, Ресей, Санкт-Петербург қ.

*e-mail: daulet.guldana@mail.ru

Азагетероциклді қосылыстардың белсенді биологиялық спектрі

Фармацевтикалық нарықта иммуностимуляторлар мен иммуномодуляторларға сұраныс өте кең. Олар туа біткен және де жүре пайда болған иммунитет тапшылығы жағдайларын емдеуде, онкологиялық науқастарды емдеуде, елдердің экологиялық қолайсыз аймақтарында тұратын науқастарды емдеуде және т.б. жағдайларда қолданылады. Ал, заманауи иммунофармакологияның алдындағы жаһандық деңгейдегі мақсат – иммуностимуляторларды өңдеу, бұл өзекті мәселе болып отыр. Осылайша, иммуностимуляциялаушы препараттардың ұсынылып отырған спектрі иммуностимуляторлардың әр тобында белгілі-бір жанама әсерлер спектрі бар екенін және де синтетикалық препараттардың болашағы зор топ екенін көрсетеді.

Сондықтан да жаңа синтетикалық иммуностимуляторларды скринингтен өткізу негізделген.

Зерттеу жұмысы барысында перифериялық қанның гемограммасын зерттеу үшін 48 ересек альбиностық зертханалық егеуқұйрықтарды қолдандық, ал лимфоциттерді фенотиптеу моноклоналды антиденелерді қолдана отырып, жанама флуоресценцияның әдеттегі әдісімен жүргізілді. Нәтижесінде, қан лейкограммасы лейкопениялық процестердің дамуына қарай өзгерді. 2-қосылыс зерттелген бірқатар қосылыстармен салыстырмалы түрде жоғары лимфопоэз- ынталандырушы белсенділікті көрсетті, 1, 2 және 3 қосылыстарда 3-қосылыс салыстырмалы түрде жоғары лимфопоэз-ынталандырушы белсенділік көрсетті. 1 және 3 қосылыстарының эритропоэзді ынталандырушы және тромбоцитопоэзді ынталандырушы белсенділігі метилурацил препараты деңгейінде болды.

Түйін сөздер: иммуностимулятор, иммуномодулятор, эритропоэз, лимфоцитопения, гранулоцитопения.

Введение

Современные алгоритмы лечения многих заболеваний включают в себя применение им- муномодулирующих средств [1, 2]. К иммуно- модуляторам относят лекарственные средства различного происхождения, оказывающие раз- нонаправленное действие на иммунную систе- му, в зависимости от ее исходного состояния.

Иммуномодуляторы используют в комплекс- ной терапии заболеваний, сопровождающихся признаками вторичной иммунной недостаточ- ности, которая характеризуется часто рециди- вирующими бактериальными, вирусными и грибковыми инфекциями, плохо поддающи- мися традиционным методам лечения [3]. Вме- сте с тем, требует уточнения несколько обсто- ятельств. Во-первых, следует понимать, что природа иммунодефицитов двояка: они подраз-

деляются на первичные и вторичные. В основе первичных иммунодефицитов нарушения лока- лизуются на генетическом уровне, что и при- водит к неэффективному функционированию иммунной системы. В этом случае говорить об иммуномодулирующей терапии бессмысленно, поскольку воздействия на иммунную систему осуществляются с заместительной целью. На- пример, при агаммаглобулинемии вводят на- сыщающие дозы внутривенных иммуноглобу- линов [4, 5]. В процессе развития иммунной реакции происходит взаимодействие клеток 3 видов: макрофагов, Т-лимфоцитов хелперов и эффекторных клеток клеточного или гумораль- ного звена иммунитета [6-11].

С практической точки зрения удобна следу- ющая классификация иммуномодулирующих средств [12].

I. Средства бактериального происхождения:

126

Биологический спектр активности азагетероциклических соединений

1. Лизаты бактерий: бронхо-мунал, имудон, рибомунил, ИРС-19; 2. Микробные макромоле- кулярные соединения: мурамилдипептид, пиро- генал, продигиозан, нуклеинат натрия [13].

II. Средства растительного происхождения:

эхинацея пурпурная [14].

III. Цитокины и медиаторы: 1. Тимические гормоны: тактивин, тималин, тимоген; 2. Пеп- тиды костного мозга: миелопид; 3. Индукторы интерферона: криданимод, тилорон, меглумин акридонацетат, арбидол, амизол; 4. Интерферо- ны: интерферон α, интерферон β; 5. Интерлей- кины: интерлейкин-1β, интерлейкин-2; 6. Коло- ниестимулирующие факторы: филграстим, мол- грамостим, сарграмостим; 7. Моноклональные антитела: инфликсимаб, адалимумаб, омализу- маб [15].

IV. Синтетические иммуномодуляторы: ле- вамизол, галавит, полиоксидоний, имунорикс [16].

Растительные лекарственные средства весь- ма популярны у населения, однако доказатель- ная база эхинацеи ограничена разрозненными нерандомизированными испытаниями, часто выполненными с огрехами в методологии иссле- дования и наличием конфликта интересов [17].

Синтетические иммуномодуляторы – пидотимод (торговое название – Имунорикс) относится к группе химически чистых синтезированных пре- паратов и представляет собой препарат пептид- ной природы, опыт применения которого в стра- нах Западной Европы превышает 15 лет. Одной из точек приложения действия пидотимода явля- ется усиление экспрессии гена интерлейкина-2, что, по-видимому, и приводит к повышению ко- личества Т- и В-лимфоцитов и их функциональ- ной активности [18]. Кроме того, в эксперименте показано, что при приеме внутрь препарат повы- шает функциональную активность гранулоци- тов и нейтрофилов [19]. In vitro показано, что Пидотимод снижает экспрессию CD30-антигена на лимфоцитах (суперсемейство рецепторов для провоспалительного цитокина – фактора не- кроза опухолей) [20, 21]. Полиоксидоний – это физиологически активное соединение с молеку- лярной массой 100 кДа. По своей химической структуре он является сополимером N-окиси 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиэтил)-1,4- этиленпиперазиния бромида с молекулярной массой 80 кДа. Полиоксидоний обладает имму- номодулирующим действием,увеличивает рези- стентность организма в отношении локальных и генерализованныхинфекций. Основой механиз- ма иммуномодулирующего действия полиок-

сидония является прямое воздействие на фаго- цитирующие клетки и естественные киллеры, а также стимуляция антителообразования [22].

В современной фармакологии выделяют следующие группы иммуностимуляторов: пре- параты микробного происхождения (нуклеинат натрия, рибомунил, имудон и др.); пептидные препараты (Т-активин, миелопид, тимоген и др.); цитокины и препараты на их основе (интер- фероны, интерлейкины); препараты на основе природных компонентов (экстракты растений и т.д.); синтетические препараты (полиоксидоний, ликопид и др.). Характерной чертой препаратов микробного происхождения является активация факторов естественной резистентности – систе- мы мононуклеарных фагоцитов, нейтрофильных гранулоцитов и натуральных киллеров [23]. В силу высокой пирогенности некоторые препара- ты микробного происхождения первого и второ- го поколения не находят применения в клинике.

Сейчас получены синтетические производные, разработанные на основе нулеината натрия:

Poludan, Inosine pranobex (Isoprinosine), Methy- luracil and Riboxin [24, 25]. Препараты на осно- ве нуклеината натрия способны стимулировать пролиферацию и рост иммунных клеток, клеток крови и т.д., но также способствуют интенсивно- му делению бактериальной микрофлоры, мета- стазированных очагов раковых клеток.

Иммуномодуляторы эндогенного происхож- дения можно условно разделить на иммунорегу- ляторные пептиды и цитокины [26]. Как извест- но, центральными органами иммунитета служат тимус и костный мозг, регулирующие развитие клеточного и гуморального иммунного ответа соответственно. Группа российских ученых под руководством академика Р.В. Петрова использо- вала эти органы для выделения иммунорегуля- торных пептидов с целью создания лекарствен- ных препаратов, восстанавливающих клеточный и гуморальный иммунитет [27-30]. Толчком к созданию подобных препаратов стало открытие нового класса биологически активных соеди- нений пептидных гормонов тимуса, к которым относится семейство тимозинов, тимопоэтинов и сывороточный тимический фактор тимулин.

Эти пептиды при поступлении в кровь оказыва- ют влияние на всю периферическую иммунную систему, стимулируя рост и пролиферацию лим- фоидных клеток [31].

Для активации деятельности клеток кост- ного мозга и стимуляции лейкопоэза был раз- решен к медицинскому применению нуклеинат натрия [32]. Этот препарат представляет собой

127 Г.Д. Даулет и др.

натриевую соль нуклеиновой кислоты, полу- ченную гидролизом и дальнейшей очисткой из дрожжей. Препарат содержит большое количе- ство предшественников нуклеиновых кислот и способствует росту и размножению практически всех делящихся клеток [33]. В дальнейшем было выявлено, что нуклеинат натрия обладает спо- собностью стимулировать факторы как врож- денного, так и приобретенного иммунитета. Это вполне естественно, так как развитие иммунного ответа связано с активной пролиферацией Т- и В-лимфоцитов [34]. Нуклеинат натрия — пер- вый препарат в своей группе, получивший раз- решение на медицинское применение не только как стимулятор лейкопоэза, но и как стимулятор иммунитета. К препаратам этого ряда относит- ся Деринат (натриевая соль нативной ДНК, вы- деленной из молок осетровых рыб), Полудан (высокоочищенная смесь натриевых солей ДНК и РНК, также получаемых из молок осетровых рыб), рибонуклеат натрия (Ридостин) — пре- парат РНК, выделенной из пекарских дрожжей [35-37].

В настоящее время за рубежом для стимуля- ции иммунитета достаточно широко использу- ются препараты растительного происхождения, в частности различные производные эхинацеи пурпурной [38].

Особой разновидностью вторичного имму- нодефицита являются онкологические заболева- ния. Злокачественные опухоли, с одной стороны, используют иммунную систему для поддержа- ния собственного роста, а с другой — блокиру- ют те компоненты иммунной защиты, которые могли бы привести к отторжению опухоли [39].

При онкологических заболеваниях значительно увеличиваются численность и активность кле- ток с иммуносупрессивной активностью: мие- лоидных супрессорных клеток и регуляторных Т-клеток. Эти популяции клеток иммунной си- стемы препятствуют развитию эффективного иммунного ответа против опухоли. Поэтому ос- новной задачей иммунотерапии при онкологиче- ских заболеваниях является перевод иммунной системы из состояния, способствующего росту злокачественной опухоли, в состояние, способ- ствующее ее отторжению [40].

Наиболее перспективной группой в разработ- ке новых иммуностимулирующих препаратов являются синтетические препараты (ликопид, имунофан, полиоксидоний, левамизол, галавит, циклоферон и др.) [41, 42]. Препараты первой подгруппы — левамизол и диуцифон облада- ют корригирующим воздействие на Т-систему

иммунитета. Левамизол также является индук- тором ИЛ-2 и обладает способностью стимули- ровать систему NK-клеток [43]. Но левамизол является очень токсичным препаратом. Отно- сящийся ко второй подгруппе ликопид является синтетическим аналогом мурамилтрипептида, минимального компонента клеточной стенки всех бактерий. Этот препарат в низких дозах усиливает поглощение и разрушение микробов и опухолевых клеток фагоцитами in vitro, сти- мулирует синтез ИЛ -1 и ФНО. В свою очередь ИЛ -1 и ФНО активируют В- и Т- лимфоциты, следствием чего является усиление антителоо- бразования и реакций клеточного иммунитета. В последние годы в иммунологической практике достаточно эффективно используется пептид- ный препарат четвертого поколения – имуно- фан. В отличие от гормонов тимуса, имунофан оказывает иммунорегулирующее действие на клетки иммунной системы вне зависимости от продукции простагландинов. Препаратом ново- го поколения синтетических иммуномодулято- ров, полученного в результате направленного химического синтеза, является полиоксидоний.

Это высокомолекулярное соединение, обладаю- щее выраженной иммунотропной активностью.

К перспективным иммуномодуляторам относит- ся также синтетическое лекарственное средство галавит, представляющее собой производное аминофталгидрозида [44].

Материалы и методы Исследуемые соединения.

Азагетероциклические соединения N,N-диэтил-2-(мезитиламино)-N-метил-2- оксоэтанаминия йодид (1), N,N,N-триэтил-2- (мезитиламино)-2-оксоэтанаминия йодид (2), N,N-диэтил-N-(2-(мезитиламино)-2-оксоэтил) пропан-1-аминия йодид (3) впервые были син- тезированы в лаборатории «Лекарственных со- единений» ДГП на ПХВ Института химических наук имени А.Бектурова.

Метод исследования гемограммы перифери- ческой крови

Для исследования гемограммы перифериче- ской крови использовали 48 взрослых лабора- торных крыс-альбиносов женского пола, 10-15 недельного возраста, массой 210-280 г. Живот- ные были получены одновременно из одного питомника – биологической клиники факуль- тета биологии и биотехнологии КазНУ имени аль-Фараби. Исследования проводились в со- ответствии с «Правилами проведения докли-

128

Биологический спектр активности азагетероциклических соединений

нических (неклинических) исследований био- логически активных веществ» и «Этическими принципами и рекомендациями по проведению научных экспериментов на животных» [29]. Все животные содержались в однородных условиях (древесная подстилка из опилок, температура в помещении 22-24°С, режим естественного осве- щения), получали стандартные кормовые раци- оны. Животные были разделены на 6 групп по 8 особей. 6-я группа животных была интактной.

С 24-х часовым интервалом проводили введение всем экспериментальным группам животных доксорубицина гидрохлорид в дозе 10 мг/кг в физиологическом растворе в объеме 0, 2 – 0,21 мл 1% раствора. Через 72 часа животным вво- дили: 1, 2, 3-й экспериментальной группе по 0, 1- 0, 12 мл 1% раствора соединения 1, 2, 3 (доза ведения 5 мг/кг на физиологическом растворе);

4 – й группе плацебо – по 0, 1- 0, 12 мл физио- логического раствора; 5 – ой контрольной груп- пе – по 0,1- 0,12 мл 1 % раствора метилураци- ла (доза введения 5 мг/кг на физиологическом растворе). Забор крови проводили в 09.00 утра из орбитальной вены крыс в гематологические пробирки VF-052SDK с ЭДТА (К2) через 7 су- ток после инъекции исследуемых соединений под мягким эфирным наркозом. Анализы крови проводили на гематологическом анализаторе

«Abacus junior VET» (Diatron, Дания). Двойной цитологический контроль проводили на мазках крови. Мазки крови подвергали окрашиванию методом Giemsa и подсчитывали под микроско- пом SA3300S под иммерсией (увеличение 7·100) по 100 клеток на каждый образец мазка, затем относительное количество клеток каждого типа переводили в абсолютное значение.

Фенотипирование лимфоцитов методом не- прямой иммунофлюоресценции.

Разделение фракций крови проводили рас- твором фиколл-уротраста. Фенотипирование лимфоцитов проводили общепринятым мето- дом непрямой флуоресценции с применением моноклональных антител: ИКО 111(СД3), ИКО 101(СД4), ИКО 31(СД8), ИКО 180(СД20) (НПЦ

«МедБиоСпектр», Москва) [30]. Клеточные ком- плексы с антителами суспендировали в 20 мкл рабочего раствора FITC-конъюгатов вторичных антител (FITC-анти-мышь, пр-во: НПЦ «МедБи- оСпектр», Москва) и инкубировали в течение 30 мин при 4оС во влажном термостате. Фиксацию клеток проводили раствором для фиксации кле- ток (8%-й раствор формалина и 4%-й раствор параформальдегида). Клеточную суспензию по- мещали в лунки на предметном стекле. Так как

учет результатов реакции проводился на люми- несцентных микроскопах предметные стекла не покрывали покровными стеклышками, а осто- рожно помещали объектив в лунку на стекле, используя 50% раствор глицерина в качестве иммерсионной среды. Использовали объектив микроскопа 100х и окуляр 10х. Подсчитывали светящиеся клетки в течение 24 часов после по- становки реакции, сохраняя препараты в темной комнате. Микроскопирование проводилось в темной комнате. Статистическая обработка ре- зультатов проводилась с приведением среднего значения, средней ошибки и доверительного ин- тервала Стъюдента.

Результаты и их обсуждение Биологическая часть исследований.

В результате трехкратной интоксикации ци- тостатическим препаратом доксорубицина ги- дрохлоридом произошло снижение лейкоцитар- ного, эритроцитарного и тромбоцитарного пока- зателя. Регистрировались следующие показате- ли крови: общий лейкоцитарный показатель со значения (12,1±0,8)·109 /л крови снизился на 6-ой день наблюдения до (5,6±0,5)·109 /л крови и да- лее на 9-ый день наблюдения до (2,37±0,16)·109 /л крови, т.е. в 5,11 раза (р≤0,01). Лейкограмма крови изменилась в сторону развития лейкопе- нических процессов. Относительный лимфо- цитарный показатель снизился с 63,72±1,1% до 47,2±1,7%. Произошло снижение относительно- го гранулоцитарного показателя с 30,00±0,8%

до 26,18±4,5%. Уровень моноцитов, эозино- филов и базофилов увеличился с 6,28±0,1% до 26,7±0,3%, т.е. в 4,25 раза (р≤0,05). Более зна- чимые изменения произошли в абсолютных по- казателях лейкограммы крови. Значительно сни- зился абсолютный лимфоцитарный показатель с (7,71±0,1)·109/л крови до (1,12±0,2)·109/л крови, т.е. в 6,88 раза (р≤0,01). Абсолютный грануло- цитарный показатель снизился (3,63±0,01)·109/л крови до (0,62±0,3)·109 /л крови, т.е. в 5,85 раза(p≤0,01). Также, несмотря на относительное увеличение относительных показателей моно- цитов, эозинофилов и базофилов, абсолютный показатель эозинофилов, базофилов и моноци- тов значительно снизился. Таким образом, после введения цитостатика доксорубицина гидрох- лорида в лейкограмме крови регистрировалась лейкопения на фоне абсолютной лимфоцитопе- нии и гранулоцитопении.

Изменения также регистрировались в эри- троцитарных показателях крови. Общий эритро-

129 Г.Д. Даулет и др.

цитарный показатель снизился с (7,5±0,9)·1012/л крови до (4,93±0,5)·1012/л крови. Очень бы- стро снизился гемоглобиновый показатель с (140,7±8,9) г/л крови до (90,75±6,2) г/л крови в 1,5 раза (p≤0,05). Естественно, что среднее со- держание гемоглобина в эритроцитах и цветной показатель также снизились.

Общий тромбоцитарный показатель снизил- ся в 7,94 раза (р≤0,01) с (560,0±12,2)·109 /л крови до (70,5±2,33)·109 /л крови. Уровень тромбокри- та также снизился.

Таким образом, интоксикация организма ци- тостатиком доксорубицина гидрохлоридом при- вела к панцитопении на фоне выраженной лей- копении, эритропении и тромбоцитопении. Лей- копения проявилась в виде гранулоцитопении и лимфоцитопении.

На фоне искусственно вызванной панцито- пении лабораторным крысам вводили исследуе- мые соединения N,N-диэтил-2-(мезитиламино)- N-метил-2-оксоэтанаминия йодид (1), N,N,N- триэтил-2-(мезитиламино)-2-оксоэтанаминия йодид (2), N,N-диэтил-N-(2-(мезитиламино)-2- оксоэтил)пропан-1-аминия йодид (3) трехкратно с забором крови на 7-ой день после последнего введения соединений.

Соединение N,N,N-триэтил-2-(мезитилами- но)-2-оксоэтанаминия йодид (2) не превышал по лейкопоэзстимулирующей активности препарат сравнения метилурацил. Общий лейкоцитарный показатель в группах с введением данного со- единения был в пределах (4,8 ± 0,1) ·109 /л крови при значении в контрольной группе (5,2±0,8)·109 /л крови. Все относительные и абсолютные по- казатели лейкограммы крови в исследуемых группах незначительно уступали аналогичным показателям контрольной группы. Абсолютный лимфоцитарный показатель в группе с введе- нием исследуемого соединения N,N,N-триэтил- 2-(мезитиламино)-2-оксоэтанаминия йодид (2) был в пределах (2,6±0,1)·109 /л крови при ана- логичном показателе в контрольной группе (3,22±0,03)·109 /л крови. Абсолютный грануло- цитарный показатель в исследуемой группе со- ставил (1,52±0,2)·109 /л крови против значения в контрольной группе (1,7±0,2)·109 /л крови (Рису- нок 1(I)) .

Следует отметить высокую эритропоэз- и тромбоцитопоэзстимулирующую активность соединения N,N,N-триэтил-2-(мезитиламино)- 2-оксоэтанаминия йодид (2). Общий эритроци- тарный показатель в группе с введением соеди- нения 2 составил (7,2 ±0,9)·1012/л крови против аналогичного показателя в контрольной группе

(5,69±0,36)·1012/л крови и значением интакт- ных животных (7,5±0,9)·1012/л крови. То есть соединение БИВ-118 в довольно короткий срок стимулировало пролиферативную активность эритропоэзного пула и восстановило эритроци- тарный показатель до уровня интактных живот- ных. Гемоглобиновый показатель в группе вве- дения соединения 2 не достиг уровня интактных животных, но был выше значения контрольной группы. Значение гемоглобина (137,0 ±12,2)г/л было выше показателя в контрольной группе (106,0 ±12,1) г/л в 1,29 раза и коррелировало с показателем в интактной группе (140,7 ±8,9)г/л (Рисунок 1(II)).

Соединение N,N,N-триэтил-2-(мезитилами- но)-2-оксоэтанаминия йодид (2) также эффек- тивно стимулировало тромбоцитопоэз в организ- ме крыс и показатель составил (639,0±13,8)·109 /л. Показатель экспериментальной группы превышал показатель контрольной группы (518,25±13,8)·109 /л крови и был на уровне ин- тактных животных (660,0 ±12,2)·109/л крови (Рисунок 1(III)). Тромбокритный показатель также коррелировал с общетромбоцитарным по- казателем и был высоким. В фармакологических исследованиях давно замечена следующая зако- номерность – если соединение успешно стиму- лирует пролиферацию эритроцитарного пула, то значит оно также эффективно будет стимулиро- вать поэз тромбоцитарного пула. Такая законо- мерность подтвердилась в исследованиях с сое- динением 2. Соединение одинаково эффективно стимулировало эритро- и тромбоцитопоэз.

Соединения N,N-диэтил-2-(мезитиламино)- N-метил-2-оксоэтанаминия йодид (1) и N,N- диэтил-N-(2-(мезитиламино)-2-оксоэтил) пропан-1-аминия йодид (3) очень эффективно стимулировали лейкопоэз и восстановление лейкоцитарных популяций шло более выраже- но в лимфоцитарных субпопуляциях. Общий лейкоцитарный показатель в группе введения соединения 3 составил (10,9±0,7)·109 /л крови, что было выше показателя контрольной груп- пы (5,2±0,8)·109 /л крови в 2,09 раза (p≤0,05) и приблизилось к показателю интактных живот- ных (12,1±0,8)·109 /л крови животных. Абсолют- ный лимфоцитарный показатель составил (8,6

±0,2)·109 /л крови против показателя контроль- ной грцппы (3,22±0,03)·109 /л крови, превышая в 2,67 раза (p≤0,05) и коррелировал с показате- лем интактной группы (7,71±0,1)·109 /л крови.

Относительный лимфоцитарный показатель лейкограммы крови животных также подтверж- дал высокий абсолютный лимфоцитарный по-

130

Биологический спектр активности азагетероциклических соединений

казатель. Относительный лимфоцитарный по- казатель составил (78,55±2,1)% при показателе в контрольной группе (62,04±3,93)% и значении в интактной группе (63,72±1,1)%. Согласно лите- ратурным источникам показатели лейкограммы крови у белых лабораторных не линейных крыс колеблются в пределах: общий лейкоцитарный показатель в пределах (5,00÷23,00)·109 /л крови, относительный лимфоцитарный показатель в пределах (50÷70)% и гранулоцитарный показа- тель (10÷50)%. Следовательно, несмотря на то, что относительный лимфоцитанный показатель был выраженно высокий, но он находился в пре- делах нормы. Относительный гранулоцитарный показатель был (11,7±0,9)% против значения контрольной группы (32,68±1,6)% и интактной группы (30,0±0,8)% и превышал в 2,79 и 2,56 раза соответственно. Далее абсолютное значение лимфоцитов в группе с введением соединения 3 составило (8,6±0,2)·109 /л крови против значения контрольной группы (3,22±0,03)·109 /л крови и показателя интактной группы (7,71±0,1)·109 /л крови, превышая в 2,67 и 1,11 раза соответствен- но. Абсолютный гранулоцитарный показатель в группе с введением соединения 3 (1,25±0,01)·109 /л крови коррелировал с показателем контроль- ной группы (1,7±0,04)·109 /л крови и был ниже показателя интактной группы (3,63±0,31)·109 /л крови в 2,90 раза (p≤0,05) (Рисунок 1(I))..

Соединение N,N-диэтил-2-(мезитиламино)- N-метил-2-оксоэтанаминия йодид (1) также эф- фективно стимулировало лейкопоэз, но уступало соединению N,N-диэтил-N-(2-(мезитиламино)- 2-оксоэтил)пропан-1-аминия йодид (3). Общий лейкоцитарный показатель в группе введения соединения 1 составил (8,97±0,8)·109 /л крови, что было выше показателя контрольной груп- пы (5,2±0,8)·109 /л крови в 1,72 раза и ниже по- казателя интактных животных (12,1±0,8)·109 /л крови животных в 1,34 раза. Абсолютный лимфоцитарный показатель в данной группе введения также был высокий (7,1±0,4)·109 /л крови, что было выше показателя контрольной группы (3,22±0,03)·109 /л крови в 2,20 раза и коррелировало с показателем интактной груп- пы (7,71±0,1)·109 /л крови. Относительный лим- фоцитарный показатель составил (79,3±0,8)%, превышая показатель контрольной группы (62,04±3,93)% и значения в интактной группе (63,72±1,1)% в 1,27 и 1,24 раза соответствен- но. Относительный гранулоцитарный показа- тель составил (8,5±0,6)% и был ниже значения контрольной группы (32,68±1,6)% и интактной группы (30,0±0,8)% в 3,84 и 3,52 раза соответ-

ственно (p≤0,05). Абсолютный гранулоцитарный показатель в группе с введением соединения 1 составлял (0,8±0,01)·109 /л крови коррелировал с показателем контрольной группы (1,7±0,04)·109 /л крови и был ниже показателя интактной груп- пы (3,63±0,31)·109 /л крови в 4,53 раза (p≤0,05) (Рисунок 1(I))..

Эритропоэзстимулирующая и тромбоцито- поэзстимулирующая активность у соединений 1 и 3 была на уровне препарата сравнения ме- тилурацила. Общий эритроцитарный показатель в группах с введением соединений 1 и 3 был в пределах (5,02÷5,82)·1012/л крови при значении в контрольной группе (5,69±0,36)·1012/л кро- ви, но ниже показателя интактных животных (7,5±0,9)·1012/л крови. Уровень гемоглобина так- же эффективно восстанавливался и составлял (107÷116) г/л при значении в контрольной груп- пе (106,0±12,2) г/л, но ниже значения интактных животных (140,7±8,9) г/л в 1,30 и 1,20 раза со- ответственно (Рисунок 1(II)).. Тромбоцитопоэз- стимулирующая активность у исследуемых со- единений была на уровне препарата сравнения метилурацила. Общий тромбоцитарный показа- тель в группах с введением соединений 1 и 3 со- ставлял (503,5 ÷543,0)·109 /л крови, что было на уровне контрольной группы (518,25 ±19,9)·109 /л крови, но ниже чем в интактной группе (660,0

±12,3)·109 /л крови (Рисунок 1(III))..

Так как соединения проявили лимфопоэз- стимулирующую активность. На втором этапе фармакологического скрининга была проведена оценка влияния азагетероциклических соедине- ний на пролиферацию отдельных субпопуляций

СД3+ – Т-лимфоцитов, СД20+ – В-лимфоцитов,

СД4+ – Т-хелперов, СД8+ – Т –цитотоксических

клеток.

Сравнительно высокую лимфопоэзстиму- лирующую активность в ряду соединений 1, 2 и 3 проявило соединение 3. Активное со- единение 3 увеличивало абсолютный СД3+ – Т-лимфоцитарный показатель до (4,37±0,9)·109 /л крови, коррелируя со значением интактных животных (4,29±0,6)·109 /л крови, достоверно превышая показатель животных группы плаце- бо (0,6±0,01)·109 /л крови в 7,28 раз (p≤0,01) и показатель контрольной группы (1,59±0,7)·109 /л крови в 2,69 раза (p≤0,05). Показатель СД20+ – В-лимфоцитов (2,02±0,01)·109 /л крови был приближен к значению интактных животных (2,34±0,03)·109 /л крови, превышая показатели контрольной группы (0,52±0,00)·109 /л крови в 3,88 раза (p≤0,01) и показатели группы плацебо (0,43±0,00)·109 /л крови в 4,69 раза (p≤0,01). Уро-